計數顯色培養(yǎng)基(jī)的(dí)用(yòng)法(fǎ)及用量(liáng)說(shuō)明
計(jì)數(shù)顯色培養(yǎng)基是一類利用微生物自(zì)身代謝(xiè)產(chǎn)生(shēng)的酶與(yǔ)相應(yīng)顯(xiǎn)色(sè)底物反應顯(xiǎn)色(sè)的原(yuán)理(lǐ)來檢測(cè)微生(shēng)物(wù)的新(xīn)型培(péi)養基。它(tā)是(shì)一(yī)種新型分離培養(yǎng)基(jī),利用顯色培(péi)養(yǎng)基(jī)進(jìn)行微(wēi)生物的(dí)篩選(xuǎn)分離,其(qí)反應(yīng)的(dí)靈(líng)敏(mǐn)度(dù)和特(tè)異(yì)性大大優(yōu)於(yú)傳(chuán)統(tǒng)培養(yǎng)基。這些(xiē)相應的顯(xiǎn)色(sè)底物(wù)是(shì)由產(chǎn)色(sè)基因和(hé)微生物部分(fēn)可代(dài)謝物質(zhì)組(zǔ)成(chéng),在(zài)特(tè)異性酶(méi)作(zuò)用下,遊(yóu)離出(chū)產(chǎn)色(sè)基因顯示(shì)一定顏色(sè),直接觀(guān)察(chá)菌落(là)顏(yán)色即(jí)可對(duì)菌種作出(chū)鑒定。
計數(shù)顯色(sè)培養基(jī)復(fù)蘇菌種前(qián)應準(zhǔn)各適於(yú)該菌(jūn)種(zhǒng)生長的(dí)固(gù)體(tǐ),液(yè)體(tǐ)培(péi)養基和培養(yǎng)設備(bèi),所(suǒ)有(yǒu)操作均應(yīng)在符(fú)合(hé)生物安全(quán)保護及(jí)無菌(jūn)條(tiáo)件下(xià)進(jìn)行。啟開菌(jūn)種宜(yí)采(cǎi)用鋸開(kāi)法(鋸(jù)開前用75%酒精棉(mián)消毒菌種管外(wài)壁)。用吸(xī)管將(jiāng)液體(tǐ)培養基(jī)0.3ml左右注(zhù)入(rù)被啟(qǐ)開(kāi)的菌種安瓶(píng)中並(bìng)吹打,使安(ān)瓶中(zhōng)的凍幹(gān)菌(jūn)種(zhǒng)溶(róng)解成(chéng)菌懸(xuán)液(yè)。
將上述(shù)菌(jūn)懸(xuán)液(yè)全(quán)部吸(xī)出(chū),分別接種(zhǒng)到(dào)固體斜(xié)麵和液(yè)體(tǐ)培(péi)養管中,一(yī)般(bān)放(fàng)置(zhì)在(zài)37℃培養箱培(péi)養(yǎng)18~24小時。對(duì)需(xū)要(yào)特殊培養(yǎng)條(tiáo)件的細(xì)菌(jūn),如(rú)需(xū)5%~10%CO2或厭氧(yǎng)條件(jiàn)等,應分(fēn)別(bié)於CO2培(péi)養箱(xiāng)或(huò)厭(yàn)氧培養(yǎng)箱中(zhōng)培養。
計數(shù)顯(xiǎn)色培養基用法:
稱(chēng)取本品23.5克,加熱溶(róng)解(jiě)於(yú)1000ml蒸(zhēng)餾水中,分(fēn)裝,121℃高(gāo)壓滅菌15分鐘(zhōng),冷(lěng)卻(què)至45-50℃待用(yòng);
傾(qīng)注法:
取(qǔ)適當(dāng)稀(xī)釋度(dù)的樣品(pǐn)液(yè)1ml加入無菌(jūn)平皿(mǐn)中(zhōng),再(zài)加入(rù)冷(lěng)卻好的計數(shù)顯(xiǎn)色培養(yǎng)基(jī)約(yuē)15ml,混合均匀,待培(péi)養(yǎng)基(jī)*凝固(gù)後,36℃培(péi)養(yǎng)24~48h進行計(jì)數;
塗布法:
取(qǔ)冷卻(què)至(zhì)45-50℃培養基,傾入無菌平(píng)皿(mǐn),待培養基*凝(níng)固(gù)後,在(zài)36℃的(dí)培(péi)養(yǎng)箱中倒置放置1-2小(xiǎo)時,加入適(shì)當稀釋度的樣(yàng)品(pǐn)液1ml,塗布於(yú)培(péi)養基上(shàng),36℃培養24~48h進(jìn)行(háng)計數。
操作步(bù)驟:
1,按國(guó)家(jiā)標準(zhǔn),SN標準(zhǔn),FDA標(biāo)準(zhǔn)或(huò)其(qí)它方法(fǎ)製(zhì)備樣(yàng)品液;
2,取樣品液(yè)1ml加入冷(lěng)卻至(zhì)45-50℃顯色(sè)培(péi)養基中混匀或(huò)塗布(bù)於(yú)平(píng)板上(shàng);
3,36℃培(péi)養24~48h,選(xuǎn)用有30~200個(gè)菌落的平板,計數(shù)顯色(sè)培(péi)養基的(dí)計數(shù)平(píng)板(bǎn)上(shàng)出(chū)現(xiàn)的(dí)紅色菌落(不論其大小和顏色深(shēn)淺(qiǎn)均計(jì)數)。