革蘭(lán)陽(yáng)性菌(jūn)鑒定(dìng)卡(qiǎ)不僅能觀察到細(xì)菌的(dí)形態而且還可(kě)將所(suǒ)有(yǒu)細菌區(qū)分(fēn)為兩大(dà)類：染(rǎn)色(sè)反(fǎn)應呈藍(lán)紫色的(dí)稱為(wéi)革蘭氏(shì)陽性(xìng)細菌，用G+表示；染(rǎn)色反(fǎn)應(yīng)呈紅(hóng)色(sè)（復染顏色）的稱(chēng)為革(gé)蘭氏陰性(xìng)細菌(jūn)，用(yòng)G--表(biǎo)示。細菌對(duì)於革蘭(lán)氏(shì)染色的(dí)不(bù)同(tóng)反應，是(shì)由(yóu)於(yú)它(tā)們(mén)細胞(bāo)壁的成(chéng)分和結(jié)構不同(tóng)而(ér)造成的(dí)。革(gé)蘭(lán)氏(shì)陽性(xìng)細菌(jūn)的(dí)細胞(bāo)壁主要(yào)是(shì)由肽聚(jù)糖形成的網(wǎng)狀結構(gòu)組成的(dí)，在染色過程中(zhōng)，當用(yòng)乙醇處(chǔ)理(lǐ)時，由(yóu)於脫水(shuǐ)而(ér)引(yǐn)起(qǐ)網(wǎng)狀結構中(zhōng)的孔(kǒng)徑變小(xiǎo)，通(tōng)透性降(jiàng)低，使結(jié)晶紫-碘(diǎn)復合(hé)物被(bèi)保(bǎo)留在細胞(bāo)內(nèi)而(ér)不易(yì)脫(tuō)色，因此，呈現(xiàn)藍(lán)紫色；革蘭(lán)氏陰性細菌的(dí)細胞(bāo)壁中肽聚(jù)糖(táng)含(hán)量低，而脂類物(wù)質含量高，當(dāng)用乙醇處理時，脂(zhī)類(lèi)物質溶(róng)解，細胞壁的(dí)通(tōng)透(tòu)性(xìng)增(zēng)加(jiā)，使(shǐ)結晶(jīng)紫-碘復合(hé)物易(yì)被(bèi)乙(yǐ)醇抽(chōu)出而脫色，然後又(yòu)被染上了(liǎo)復(fù)染(rǎn)液(yè)（番(fān)紅）的(dí)顏色，因此呈現(xiàn)紅色(sè)。

　　革(gé)蘭陽性菌(jūn)鑒定卡(qiǎ)使(shǐ)用注意(yì)事項(xiàng)：

　　（1）KOH溶液與菌(jūn)落(là)比例應(yīng)適當(dāng)，如菌(jūn)懸(xuán)液太(tài)稀（加菌(jūn)落(là)太少(shǎo)）可(kě)出(chū)現(xiàn)假陰性(xìng)。4%KOH溶液(yè)應新(xīn)鮮(xiān)配(pèi)製(zhì)（即用前(qián)當日配製(zhì)），否則也(yě)易出現假陰性。

　　（2）革蘭(lán)陽(yáng)性(xìng)菌(jūn)培養(yǎng)物(wù)如超過(guò)48小時，可能隨著菌(jūn)齡增(zēng)加(jiā)而失(shī)去革蘭陽性菌的(dí)特性，而(ér)使本試(shì)驗從陰性(xìng)變(biàn)成陽性，即出(chū)現假(jiǎ)陽(yáng)性。因此(cǐ)必須(xū)使用新鮮培(péi)養物。

　　注：如果有些菌(jūn)革蘭氏染色區(qū)分(fēn)不(bù)明顯，建議兩(liǎng)種方(fāng)法結合(hé)使(shǐ)用，保證(zhèng)結(jié)果的(dí)準確性(xìng)。

　　製備菌(jūn)液：加1-2滴自(zì)來水(shuǐ)於(yú)小試(shì)管(guǎn)中，用接(jiē)種(zhǒng)環從(cóng)斜(xié)麵(miàn)上挑(tiāo)取(qǔ)2-3環的(dí)菌(jūn)苔於試管中並充(chōng)分(fēn)打(dǎ)均(jūn)，製成(chéng)濃稠(chóu)的菌(jūn)液。

　　加(jiā)染(rǎn)色液(yè)：加5%孔雀綠水(shuǐ)溶(róng)液2-3滴(dī)於小試管中，用接(jiē)種攪拌(bàn)使(shǐ)染料(liào)與菌液(yè)充分混(hùn)合。

　　加熱：將此試管浸(jìn)於沸(fèi)水浴(yù)（燒(shāo)杯(bēi)）中(zhōng)，加熱15-20min。

　　塗片(piàn)：用接種(zhǒng)環從試管底部挑(tiāo)數環菌(jūn)液於潔淨(jìng)的玻片(piàn)上，並(bìng)塗(tú)成薄膜。

　　固定(dìng)：將(jiāng)塗片(piàn)通(tōng)過微火3次。

　　脫色：用水洗(xǐ)，直至流(liú)出(chū)的水(shuǐ)中無孔雀(què)綠顏(yán)色為止。

　　復染：加沙黃水(shuǐ)溶(róng)液(yè)，染2-3min後(hòu)，頃(qǐng)去染色液(yè)，不(bù)用水洗，直接用吸(xī)水(shuǐ)紙吸幹。

　　鏡(jìng)檢：用(yòng)油鏡觀察。